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細胞培養中消除組織培養污染的實(shí)驗步驟是怎樣的

更新時(shí)間:2022-10-21      點(diǎn)擊次數:780
  當重要的培養污染時(shí),研究者可能試圖消除或控制污染。首先,確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母,把污染細胞與其它細胞系隔離開(kāi),用實(shí)驗室消毒劑消毒培養器皿和超凈臺,檢查HEPA過(guò)濾器。 高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性,因而,做劑量反應實(shí)驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點(diǎn)在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂(lè )菌素時(shí)尤其重要。下面是我司推薦的確定毒性水平和消除培養污染的實(shí)驗步驟:
 
  1. 在無(wú)抗生素的培養基中消化、計數和稀釋細胞,稀釋到常規細胞傳代的濃度。
 
  2. 分散細胞懸液到多孔培養板中,或幾個(gè)小培養瓶中。在一個(gè)濃度梯度范圍內,把選擇抗生素加入到每一個(gè)孔中。例如,兩性霉素B推薦下列濃度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。
 
  3. 每天觀(guān)測細胞毒性指標,如脫落,出現空泡,匯合度下降和變圓。
 
  4. 確定抗生素毒性水平后,使用低于毒性濃度2~3倍濃度的抗生素的培養液培養細胞2~3代。
 
  5. 在無(wú)抗生素的培養基中培養細胞一代。
 
  6. 重復步驟4。
 
  7. 在無(wú)抗生素的培養基中培養4~6代,確定污染是否以已被消除。
 
  我司分析細胞培養細胞培養技術(shù)也叫細胞克隆技術(shù),在生物學(xué)中的正規名詞為細胞培養技術(shù)。不論對于整個(gè)生物工程技術(shù),還是其中之一的生物克隆技術(shù)來(lái)說(shuō),細胞培養都是一個(gè)不可少的過(guò)程。
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