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FISH探針加樣的注意事項

更新時(shí)間:2022-12-26      點(diǎn)擊次數:776
  FISH探針可分為位點(diǎn)特異性探針和著(zhù)絲粒探針,位點(diǎn)特異性探針又可分為計數探針和融合/分離探針。計數探針是通過(guò)標記一段特異性的DNA片段,通過(guò)計數信號的數量而判斷染色體或基因狀態(tài)的一種標記探針。由于正常人的染色體/基因是二倍體,那么正常人的檢測信號就是兩個(gè),當信號多于兩個(gè)或者少于兩個(gè),便可判斷染色體或者基因發(fā)生了異常。
  FISH探針基本原理是將DNA(或RNA)探針用特殊的核苷酸分子標記,然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上,再用與熒光素分子偶聯(lián)的單克隆抗體與探針?lè )肿犹禺愋越Y合來(lái)檢測DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對定量分析。
  該技術(shù)具有快速、安全、靈敏度高以及探針可長(cháng)期保存等特點(diǎn),目前已廣泛應用于細胞遺傳學(xué)、腫瘤生物學(xué)、基因定位、基因作圖、基因擴增、產(chǎn)前診斷及哺乳動(dòng)物染色體進(jìn)化研究等領(lǐng)域。
  FISH探針的加樣:參照選用廠(chǎng)商推薦或經(jīng)過(guò)本實(shí)驗室有效性驗證納入標準化操作流程文件的探針加樣量,加到待雜交組織中央處,使用合適的蓋玻片,橡膠水泥密封四邊。
  注意事項:
  探針的使用和配制遵照本單位選用試劑的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)操作;
  蓋玻片一般采用硅化蓋玻片或無(wú)菌的蠟膜;
  注意環(huán)境光強度,避免太陽(yáng)光或強烈的光照;
  加蓋玻片時(shí)注意不要留有氣泡,避免因氣泡造成干片現象,導致無(wú)雜交信號或雜交率降低;
  蓋玻片邊緣封膠不嚴密也會(huì )出現干片現象。
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